Задать вопрос
1000 максимум символов
Ankom Technology Метод 3   08-05
Определение истинной переваримости (IVTD)
с использованием инкубатора DaisyII

(для D200 и D200I)
ОПРЕДЕЛЕНИЕ
Настоящий метод позволяет определять истинную переваримость в лабораторных условиях (IVTD) с использованием инкубатора DaisyII компании ANKOM Technology.
ОБОРУДОВАНИЕ
  1. Инкубатора DaisyII компании ANKOM Technology.
  2. Фильтровальные пакетики, изготовленные из химически инертного и термоустойчивого фильтрующего материала (ANKOM F57).
  3. Устройство запаивания пакетиков, способное надёжно запаивать фильтровальные пакетики (1915, ANKOM Technology).
  4. Термос.
  5. Анализатор клетчатки ANKOM A200/A220.

РЕАКТИВЫ

    1. Буферный раствор А:
Реактив грамм/литр
KH2PO4 10.0
MgSO4*7H20 0.5
NaCl 0.5
CaCl2*2H20 0.1
Мочевина 0.5
    1. Буферный раствор В:
Реактив грамм/литр
Na2CO3 15.0
Na2S *9H20 1.0
  1. Нейтрально – детергентный раствор.

МЕТОДИКА РАБОТЫ

Подготовка фильтровальных пакетиков и образцов

Предварительно промойте фильтровальные пакетики F57 в ацетоне в течение трех-пяти минут и полностью просушите их. Взвесьте каждый фильтровальный пакетик и запишите его вес (W1). Оттарируйте весы и взвесьте 0.25 грамм образца непосредственно в фильтровальном пакетике (W2).

Замечание: При анализе продолжительностью 48 часов допустим размер образца 0.5 грамм.

Запаяйте пакетик с образцом при помощи устройства запаивания пакетиков так, чтобы шов располагался примерно в 4 мм от края, и поместите его в сосуд инкубатора (до 25 образцов на сосуд). Образцы должны быть равномерно распределены по обеим сторонам перегородки сосуда. Предусмотрите, по крайней мере, один пустой пакетик без образца для расчета корректирующего фактора (C1).

Приготовление комбинированного буферного раствора (для каждого сосуда)

  1. Предварительно нагрейте оба буферных раствора (А и В) до 39°C. В отдельной емкости добавьте примерно 266 мл раствора В к 1330 мл раствора А (соотношение 1:5). Точного соотношения растворов добиваются проверкой кислотности, которая должна быть равна 6.8pH при температуре 39°C. В дальнейшей проверке pH нет необходимости. Добавьте 1600 мл раствора в каждый сосуд для определения переваримости.
  2. Поместите сосуды для определения переваримости в инкубатор и включите переключатели нагрева и вращения. Для выравнивания температуры в сосудах подождите 20-30 минут.

Приготовление инокулята и инкубация

Поддерживайте температуру в сосудах равной 39°C.

  1. Подготовьте два двухлитровых термоса с водой, нагретой до 39°C. Опорожните термосы непосредственно перед сбором инокулята. Поместите два литра инокулята в термосы. Добавьте примерно две «горсти» кормовой массы из рубца в один из термосов.
  2. Предварительно нагрейте блендер, наполнив его водой, нагретой до 39°C. Слейте воду непосредственно перед заполнением его инокулятом из термоса. Продуйте контейнер блендера углекислым газом (CO2) и перемешивайте на высокой скорости в течение 30 минут. Процесс перемешивания с использованием блендера необходим для перемешивания микроорганизмов, находящихся в кормовой массе рубца, для получения представительной микробиологической популяции для ферментации в лаборатории. Профильтруйте полученную массу через 4 слоя марли в пятилитровую колбу, предварительно нагретую до 39°C. Профильтруйте оставшуюся жидкость из рубца из другого термоса через 4 слоя марли в ту же самую пятилитровую колбу. Замечание: Для облегчения фильтрования по краям марли должно быть больше. Необходимо периодически продувать колбу углекислым газом и продолжать эту процедуру при переносе инокулята.
  3. Выньте один сосуд из инкубатора и добавьте 400 мл инокулята к буферному раствору и образцам. Продуйте сосуд углекислым газом в течение 30 секунд и закройте крышку.
  4. Повторите эту процедуру для остальных сосудов. Замечание: Углекислый газ на должен пробулькиваться через раствор инокулята, углекислота должна образовывать газовую прослойку над содержимым сосуда.
  5. Инкубируйте в течение 48 часов. Инкубатор будет поддерживать температуру 39.5±5oC. Если температура сосудов отличается более чем на один градус, переместите инкубатор в более теплое место или накройте инкубатор теплоизоляционным материалом.
  6. После завершения процесса инкубации выньте сосуды и слейте жидкость. Промойте пакетики холодной водопроводной водой до тех пор, пока вода не станет чистой. Старайтесь не трясти пакетики.
  7. При определении истинной переваримости необходимо удалить микробиологические остатки и любые оставшиеся растворимые фракции при помощи нейтрально – детергентного раствора. После промывки образцов водой поместите их в анализатор клетчатки ANKOM A200 и следуйте процедуре по определению нейтрально-детергентной клетчатки. После этого запишите вес каждого образца (W3). Замечание: До выполнения процедуры на приборе ANKOM A200, образцы можно хранить холодильнике или морозилке.

РАСЧЁТЫ

Ankom_m2_f1

где: W1 вес пакетика,
       W2 вес образца,
       W3 вес образца вместе с пакетиком после инкубации и экстракции,
       C1 корректирующий фактор (вес пакетика после окончательной сушки, делённый на первоначальную массу пакетика).