Задать вопрос
1000 максимум символов
Ankom Technology Метод 9   08-16-06
Определение нейтрально-детергентной клетчатки (NDF) в кормах
с использованием технологии фильтровальных пакетиков

(для A2000 и A2000I)
ОПРЕДЕЛЕНИЕ
Настоящий метод позволяет определять нейтрально-детергентную клетчатку (NDF), под которой понимается остаток после дигерирования образца. Данный остаток представляет собой преимущественно гемицеллюлозу, целлюлозу и лигнин.

ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ
Данный метод применим зерну, кормам, комбикормам и к другим материалам, содержащим клетчатку.
ОБОРУДОВАНИЕ
  1. Аналитические весы с дискретностью 0.1 мг.
  2. Сушильный шкаф, способный поддерживать температуру 102 ± 2°C
  3. Оборудование для дигерирования, способное проводить дигерирование при температуре 100 ± 0.5°C и поддерживать давление в пределах 10-25 psi (0.7-1.7 атм). Оборудование также должно быть способно поддерживать равномерный поток раствора вокруг каждого образца для обеспечения однородности экстракции. (ANKOM 2000, ANKOM Technology).
  4. Фильтровальные пакетики, изготовленные из химически инертного и термоустойчивого фильтрующего материала, которые можно герметично запаивать и которые могут удерживать частицы до 25 микрон, свободно пропуская при этом раствор (F57 или F58, ANKOM Technology, Примечание пункт 1).
  5. Устройство запаивания пакетиков, способное надёжно запаивать фильтровальные пакетики (1915, ANKOM Technology).
  6. Эксикаторная сумка. Герметично закрывающаяся сумка с поглотителем влаги, позволяющим поглощать водяные пары из воздуха вокруг фильтровальных пакетиков (сумка MoistureStop, ANKOM Technology).
  7. Маркер, устойчивый к воздействию растворителей и кислот (F08, ANKOM Technology).

РЕАКТИВЫ

  1. Нейтрально-детергентный раствор: добавьте 30 грамм додецилсульфата натрия (USP), 18.61 грамм двухводной двунатривой соли этилен-диаминтетрауксусной кислоты, 6.81 грамм тетраборнокислого натрия (буры), 4.56 грамм натрия фосфорнокислого двузамещенного, безводного и 10 мл триэтиленгликоля в 1 литр дистиллированной воды (готовый химический раствор можно приобрести в компании ANKOM Technology). Проверьте, что pH находится в диапазоне 6.9 – 7.1. Перемешайте и нагрейте раствор для лучшей растворимости (см. Меры предосторожности).
  2. Альфа-амилаза. Термостабильная бактериальная альфа-амилаза, активность 17 400 единиц/мл (FAA, ANKOM Technology).
  3. Сульфат натрия Na2SO3, безводный (FSS, ANKOM Technology).

ПОДГОТОВКА ОБРАЗЦА К АНАЛИЗУ

Измельчите образец в лабораторной центробежной мельнице с ситом с отверстиями диаметром 2 мм или в ножевой мельнице (системы Wiley) с ситом с отверстиями диаметром 1 мм. У более тонко размолотых образцов может происходить потеря частиц сквозь ткань пакетика, что будет приводить к занижению результатов анализа.

МЕТОДИКА РАБОТЫ

  1. С помощью устойчивого к действию растворителей и кислот маркера пронумеруйте фильтровальные пакетики. Взвесьте каждый фильтровальный пакетик (W1) и затем установите весы на ноль. Примечание: не высушивайте предварительно фильтровальные пакетики. Холостой опыт с пустым пакетиком (бланк) позволит внести поправку на влажность материала пакетика.
  2. Взвесьте 0.45–0.55 грамм подготовленного образца (W2) непосредственно в пакетике. Избегайте попадания образца ближе 4 мм от верхнего края пакетика.
  3. С помощью устройства для запайки пакетиков надёжно запаяйте фильтровальный пакетик так, чтобы шов располагался примерно в 4 мм от края. Обеспечьте достаточный для полной герметизации пакетика нагрев и дайте ему остыть в течение 2 секунд.
  4. Взвесьте один пустой пакетик и включите его в анализируемую партию образцов для определения корректирующего фактора C1 (Примечание пункт 1).
  5. Подвергайте предварительному экстрагированию только образцы, содержащие продукты из сои или продукты с содержанием жира более 5%: Чтобы провести экстрагирование, поместите 24 пакетика с образцами в контейнер, залейте достаточным количеством ацетона так, чтобы покрыть пакетики и закрепите верхнюю секцию. Встряхните контейнер 10 раз и дайте пакетикам замачиваться в течение 10 минут. Повторите процедуру со свежим ацетоном. Слейте ацетон и поместите пакетики на поддон из проволочной сетки, чтобы дать им просохнуть до воздушно-сухого состояния. Исключение – обжаренные соевые бобы: вследствие того, что соевые бобы подвергаются обработке обжариванием, процесс экстрагирования следует изменить. Поместите образцы обжаренных соевых бобов в контейнер. Залейте достаточное количество ацетона, чтобы покрыть образцы и закрепите верхнюю секцию. Встряхните контейнер 10 раз и слейте ацетон. Добавьте свежий ацетон и замачивайте образцы в течение двенадцати часов. После замачивания слейте ацетон и поместите пакетики на поддон из проволочной сетки для просушки до воздушно-сухого состояния.
  6. Поместите не более 24 пакетиков в держатель. Независимо от числа используемых пакетиков, следует использовать все девять секций держателя. Разместите по три пакетика в каждой секции и затем наденьте все секции на центральный стержень, поворачивая каждую секцию на 120° относительно предыдущей. Вставьте держатель с пакетиками в реакционный сосуд анализатора и поместите сверху на пустую девятую секцию груз-утяжелитель так, чтобы держатель оставался в погруженном состоянии. Примечание: перед помещением держателя в анализатор, убедитесь, что сосуд остыл после предыдущего анализа. Если сосуд ещё тёплый, заполните его холодной водой, а затем слейте её.
  7. Следуйте указаниям на дисплее анализатора ANKOM 2000:
    • Выберите режим NDF (кислотно-детергентная клетчатка),
    • Закройте крышку,
    • Убедитесь, что включена подача горячей воды (>70°C),
    • Нажмите START.
    • После того, как будет добавлен нейтрально-детергентный раствор и начнется перемешивание, вручную добавьте 20 грамм Na2SO3 и 40 мл альфа-амилазы.
    • Закройте крышку,
  8. Присоедините дозатор амилазы к порту B и заполните его раствором 8 мл альфа-амилазы и 350 мл дистиллированной воды. Анализатор ANKOM 2000 автоматически добавит этот раствор к первой и второй промывке.
  9. Когда процессы экстрагирования и промывки будут завершены и анализ закончится, откройте крышку и удалите образцы. Осторожно отожмите избыточную влагу из пакетиков. Поместите пакетики в лабораторный стакан на 250 мл добавьте достаточное количество ацетона так, чтобы все пакетики были покрыты жидкостью и оставьте намокать на 3-5 минут.
  10. Выньте пакетики из ацетона и поместите на проволочную сетку для высушивания до воздушно-сухого состояния. Окончательное высушивание проводите в сушильном шкафу при температуре 102 ± 2°C (сушка в большинстве шкафов обычно занимает 2-4 часа). Примечание: не помещайте пакетики в сушильный шкаф до тех пор, пока ацетон не испарится полностью.
  11. Выньте пакетики из сушильного шкафа, и сразу же поместите их в складную эксикаторную сумку. Удалите из сумки воздух путём проглаживания (сплющивания). Охладите до комнатной температуры и взвесьте пакетики (W3). Примечание: не используйте обычный эксикатор.

РАСЧЁТЫ

Ankom_m9_f1

где: W1 вес пустого пакетика,
       W2 вес образца,
       W3 вес пакетика с клетчаткой после экстракции,
       C1 корректирующий фактор (вес пакетика после окончательной сушки, делённая на первоначальную массу пакетика).

МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Порошкообразные химикаты раздражают слизистые оболочки. При работе с этими реактивами используйте пылезащитную маску и перчатки.

Ацетон чрезвычайно огнеопасен. Избегайте накопления статического электрического заряда и работайте с ним под тягой.

ПРИМЕЧАНИЯ

  1. При расчёте содержания клетчатки следует использовать корректирующий фактор (C1), полученный с помощью скользящего среднего. Включение пустого пакетика в каждую серию анализируемых образцов используется главным образом для обнаружения потери частиц образца. Фактор С1 превышающий 1.0000 указывает на то, что часть материала образца была потеряна из фильтровального пакетика и отложилась на пустом пакетике. Любая потеря частиц образца из фильтровального пакетика приведёт к ошибочным результатам анализа. Если действительно наблюдается потеря частиц, то следует пересмотреть метод размола образца.